使用外來體的研究人員的挑戰(zhàn)包括手動設(shè)置密度梯度，因為它是乏味，耗時，并受用戶，實驗室和方法變異性的影響。還需要更大的尺寸和濃度分析的準確性。與此同時，該*域的**呼吁建立標準協(xié)議。1我們通過成本效益，大規(guī)模純化和快速分析外來體來為這些挑戰(zhàn)提供解決方案。具體來說，Biomek 4000工作站有助于克服人為變量，并為梯度設(shè)置提供一致，可重復(fù)，高通量的方法，代表了擴大問題的突破性解決方案。Optima超速離心系統(tǒng)幫助研究人員保持運行之間的可靠性，使結(jié)果高度可重現(xiàn)。
雖然科學(xué)家已經(jīng)知道胞外囊?guī)资?，?*近才有技術(shù)能夠區(qū)分外來體與微泡和凋亡體。膜囊泡的分類 - 以及它們分離的**合適和有效的方案 - 仍然是研究的強烈*域。當隔離囊泡時，使用能夠分離囊泡的系統(tǒng)是**關(guān)重要的，以避免交叉污染。同時，需要增加尺寸和濃度準確度，以及增強工作流程。外來體是幾乎所有細胞類型釋放的膜囊泡（直徑約30-120nm）。2,3它們可以在血漿和其他體液中自由獲得，并含有蛋白質(zhì)，mRNA和miRNA，代表它們分泌的細胞。如圖4所示，5 外來體作為診斷以及治療生物標志物已成為焦點。另外，外切體已經(jīng)顯示為細胞間通訊功能的一部分，對抗腫瘤和促腫瘤活性都有影響。6先前的工作已經(jīng)提供了深入了解使用密度梯度超速離心，外來體的隔離2,7雖然有是獲得純化后的大小和濃度的更具體的確認的一種努力。
Beckman Coulter提供涵蓋整個外來體工作流程的產(chǎn)品，使用自動化，離心和動態(tài)光散射（DLS）來純化和分析外來體樣品。Biomek 4000實驗室自動化工作站幫助克服了人的變數(shù)，并為密度梯度設(shè)置提供了一致，可重復(fù)，高通量的方法 - 擴大障礙的優(yōu)雅解決方案。制備性超速離心有助于保持運行之間的可靠性和高重現(xiàn)性。重要的是，使用Optima MAX-XP和Optima XPN的制備性超速離心達到將生物大分子樣品及時分離到其密度梯度的等密度點所需的g力。DelsaMax CORE DLS平臺用于級分的尺寸分析，因為外來體顆粒可以是：（1）在溶液中分析，（2）具有統(tǒng)計學(xué)意義，（3）與電子顯微鏡相比具有更少的成本和時間。而不是花幾個小時來分析幾百個粒子，DelsaMax核心能夠在一分鐘內(nèi)分析和確定數(shù)千個外來體。
步驟1-以對數(shù)期細胞密度-1×10 5細胞/ mL生長的Jurkat細胞
步驟2--臺式離心機（Allegra X-15R）以除去細胞和細胞碎片/
步驟3-高速離心機（Optima XPN）以除去較小的細胞碎片。
步驟4-高速離心機（Optima XPN）沉淀外來體。
步驟5 - Biomek 4000工作站設(shè)置密度梯度
步驟6-密度梯度超速離心（Optima XPN）以從共純化的蛋白質(zhì)和其他酵母囊泡分離外來體。
步驟7-高速離心機（Optima MAX-XP）將溶劑從碘克沙醇和蔗糖交換為磷酸鹽緩沖鹽水
步驟8-DelsaMax CORE用于尺寸測定和分析
1. Simpson RJ和Mathivanan S.胞外微泡：需要G際公認的命名和嚴格的純化標準。J Proteomics Bioinform。5：（2012）。
Van Der Pol E et al。用于檢測和表征微粒和外來體的光學(xué)和非光學(xué)方法。血栓形成和止血雜志。8.12; 2596-2607：（2010）。
3. Simons M和Raposo G.用于細胞間通訊的外來體 - 囊泡載體。細胞生物學(xué)中的當前觀點。21.4; 575-581：（2009）。
4.Keller S et al。外來體：從生物發(fā)生和分泌到生物功能。免疫學(xué)信。107.2; 102-108：（2006）。
5. Pegtel，Michiel D et al。通過外來體的病毒miRNA的功能性遞送。G家科學(xué)院學(xué)報。107.14; 6328-6333：（2010）。
6. Duijvesz D et al。外來體作為前列腺癌的生物標志物寶庫。歐洲泌尿科。59.5; 823-831：（2011）。
7.Tauro BJ et al。超離心，密度梯度分離和免疫親和捕獲方法的比較，用于分離人結(jié)腸癌細胞系LIM1863來源的外泌體。方法。56.2; 293-304：（2012）。
